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pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成
發布時間:2023-04-26 09:18:37

PCR技術類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性一退火—延伸三個基本反應步驟構成。這個反應過程在PCR反應容器中進行,隨著基因擴增儀的不斷發展,其反應容器也經歷了從1.5ml到0.2ml (0.25m1)的離心管逐步發展成PCR專用的薄壁的0.2ml,0.1mlpcr管。隨著pcr擴增反應數量的提高,逐步形成了PCR條、PCR板高通量的基因擴增容器。

PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成

模板DNA的變性:

模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,以便它與引物結合,為下輪反應做準備。

模板DNA與引物的退火(復性):

模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右后,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合。

引物的延伸:

DNA模板——引物結合物在Taq的作用下,以dNTP為反應原料,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。

PCR技術的基本原理

該技術是在模板DNA、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應。

DNA聚合酶以單鏈DNA為模板,借助一小段雙鏈DNA來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段互補序列結合,形成部分雙鏈。

在適宜的溫度和環境下,DNA聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3′-OH末端,并以此為起始點,沿模板5′→3′方向延伸,合成一條新的DNA互補鏈。


(文章來源于互聯網)

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