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實時定量ＰＣＲ儀的用途
實時定量ＰＣＲ儀主要用于檢測特定基因在待測樣品中出現(xiàn)的次數(shù)，以高分辨率的變性梯度凝膠電泳ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ，對ＰＣＲ產(chǎn)物進行測序的聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物分析方法。
實時定量ＰＣＲ儀的使用方法
實時定量ＰＣＲ儀的使用方法如下：
１． 開機預(yù)熱：儀器接通電源，屏幕顯示“Ｓｔａｒｔ”鍵，按“Ｅｎｔｅｒ”鍵開機，進入待機狀態(tài)。開機后儀器需預(yù)熱３０分鐘，期間“Ｓｔａｒｔ”鍵可直接開機，預(yù)熱完成后自動進入主界面。
２． 操作主界面：開機后儀器進入主界面，主界面顯示儀器的運行狀態(tài)、時間、燈開關(guān)狀態(tài)、校準序列和用戶登錄界面。用戶可通過點擊“主菜單”進入ＰＣＲ儀的工作菜單。
３． 開蓋放光：在待機界面按“擴展”鍵，選擇“放光”進入放光模式。此時ＰＣＲ儀的光室會打開，同時背景燈光熄滅，儀器會自動去除光室內(nèi)的殘留熒光。
４． 校準序列：在待機界面按“擴展”鍵，選擇“校準序列”進入校準序列模式。在ＰＣＲ儀工作前，必須進行校準序列。校準序列是儀器根據(jù)ＰＣＲ反應(yīng)體系體積和反應(yīng)體系中熒光染料的濃度計算出的一個校準系數(shù)。校準序列可以由用戶自定義，用戶可以在“校準序列模板”中選擇相應(yīng)的模板，也可以自定義新的模板。
５． 用戶登錄：在開機界面按“擴展”鍵，選擇“用戶登錄”進入用戶登錄模式。在ＰＣＲ儀開機狀態(tài)下進行用戶登錄，登錄信息為開機密碼。
６． 手動ＰＣＲ：在主界面按“擴展”鍵，選擇“ＰＣＲ”進入ＰＣＲ模式。ＰＣＲ模式分為一步法和多步法。
７． 板次預(yù)設(shè)置：在ＰＣＲ儀工作菜單中點擊“板次預(yù)設(shè)置”，然后根據(jù)實際情況設(shè)置。用戶可對板次進行設(shè)置和保存，保存的內(nèi)容只對本次儀器重啟后的使用有效。在保存板次時需輸入正確的開機密碼。
８． 用戶退出：在主界面按“取消”鍵，退出ＰＣＲ儀的操作模式。
實時定量ＰＣＲ儀的注意事項
在使用實時定量ＰＣＲ儀時，有幾個注意事項：
１． 實驗操作人員必須熟悉所用ＰＣＲ儀的基本原理、性能狀態(tài)以及操作步驟等，并嚴格按照說明書操作。
２． 在ＰＣＲ儀開啟之前，要確保所有反應(yīng)體系都已置于ＰＣＲ儀腔體內(nèi)，并關(guān)閉ＰＣＲ儀門。
３． 開始ＰＣＲ反應(yīng)之前，應(yīng)設(shè)置好ＰＣＲ儀的相關(guān)參數(shù)，如循環(huán)參數(shù)、溫度等。
４． 在ＰＣＲ反應(yīng)運行過程中，應(yīng)避免非特異性擴增，因此需要設(shè)計特異性引物。
５． 熒光定量ＰＣＲ的實驗結(jié)果易受不同儀器、不同試劑和不同操作者的影響，因此應(yīng)建立標準化體系，以獲得更好的實驗效果。
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